產(chǎn)品介紹：

瑞典Attana公司制造的Attana Cell 200蛋白互作分析儀，是一種無需標(biāo)記全會精神、可直接在細(xì)胞表面測量分子相互作用的生物傳感器系統穩定性，其傳統(tǒng)生物傳感器與基于細(xì)胞的分析方法之間的空白。

 

Attana蛋白互作分析儀依托于石英晶體微天平（Quartz Crystal Microbalance集中展示，簡稱QCM）技術(shù)實力增強，外加的交流電勢使石英晶體在共振頻率下震動，當(dāng)分子流經(jīng)晶體并與表面結(jié)合探索創新，振動頻率會發(fā)生變化重要工具，其頻率差異可以用來反映實時的分子相互作用。

 

自2010年上市以來配套設備，Attana Cell 200蛋白互作分析儀已廣泛用于蛋白互作更優質、蛋白細(xì)胞互作、抗體藥研發(fā)等領(lǐng)域推進高水平，贏得了包括大學(xué)脫穎而出、藥企、CRO實驗室的信任生產創效，與制藥化工Lonza集團(tuán)結構、胰島素研發(fā)明星諾和諾德等長期合作。

 

相比傳統(tǒng)分子互作檢測技術(shù)，Attana開創(chuàng)了直接在細(xì)胞層面進(jìn)行實時原位分子結(jié)合動力學(xué)的檢測方法雙重提升，更準(zhǔn)確地反映了體內(nèi)環(huán)境的分子間互作戰略布局，能夠高質(zhì)量、精確地研究其特異性表現明顯更佳、動力學(xué)和親和力狀態。

 

Attana Cell 200蛋白互作分析儀檢測優(yōu)勢

1、可檢測蛋白與細(xì)胞的相互作用
2指導、可檢測蛋白與組織切片的相互作用
3廣泛認同、可檢測細(xì)胞與細(xì)胞的相互作用
4、可使用粗制蛋白樣品

 

Attana蛋白互作分析儀應(yīng)用實例

用QCM技術(shù)檢測蛋白藥物與腫瘤組織切片的親和動力學(xué)

長久以來流動性，將癌癥組織用甲醛固定石蠟包埋（FFPE）后做組織切片鍛造，進(jìn)行免疫組化（IHC）分析，是癌癥相關(guān)抗原的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法持續創新。但免疫組化本身很難定量抗體與癌癥相關(guān)抗原結(jié)合的特異性和親和力改善。Clausen等人建立了一套以Attana Cell 200 QCM技術(shù)為核心，直接在組織切片上進(jìn)行實時原位分子親和動力學(xué)的檢測方法協調機製。

 

研究者直接在FFPE人胎盤組織是目前主流、乳腺癌和前列腺腫瘤標(biāo)本中，測定了rVAR2蛋白與它的胎盤樣（pl-CS）受體之間的相互作用高質量，發(fā)現(xiàn)rVAR2與FFPE人胎盤充分發揮、腫瘤組織存在納摩爾級的親和力，與pl-CS陰性的正常組織無相互作用管理。

 

進(jìn)一步用雄激素受體N-20的抗體（抗AR）對此方法進(jìn)行評估設計，發(fā)現(xiàn)Attana得出的KD值與可用抗原表位的數(shù)量無關(guān)，表明Attana不僅能在組織標(biāo)本上直接對抗原-抗體結(jié)合親和力進(jìn)行定量改進措施，還能評估抗體所能識別的抗原表位的數(shù)量就此掀開。

 

基于這些結(jié)果，研究者認(rèn)為Attana QCM技術(shù)不僅可用于挑選生物制劑今年，還能用于開發(fā)新型高親和力的藥物穩步前行。（Clausen, T. M., et al. Real-time and label free determination of ligａnd binding-kinetics to primary cancer tissue specimens; a novel tool for the assessment of biomarker targeting. Sens Biosensing Res. 2016; 9: 23-30.）

圖1.Attana Cell 200蛋白互作分析儀與COP-1檢測芯片。

圖2.免疫組化鑒定為陽性的甲醛固定石蠟包埋組織樣品被切成5μm厚的薄片動手能力，并固定在COP-1芯片中心逐步改善。 

圖3.（b）Attana測定出rVAR2蛋白與胎盤組織的KD值為4.27nM，具有高親和力提升。（c）當(dāng)添加了能抑制rVAR2粘附于胎盤組織的CSA溶液后持續，rVAR2蛋白與胎盤組織的結(jié)合曲線不再有明顯的結(jié)合點(diǎn)和解離點(diǎn)。

圖4.（a）免疫組化結(jié)果顯示再獲，與作為正常組織對照的扁桃體組織切片相比產品和服務，rVAR2蛋白與乳腺癌、前列腺腫瘤組織切片有強(qiáng)相互作用體驗區，進(jìn)一步用Attana測定其KD值分別為8.9nM和6.65nM增多，而與扁桃體組織的結(jié)合曲線無明顯的結(jié)合點(diǎn)和解離點(diǎn)活動上，無法測出其KD值。（b和c）用V5-FITC的抗體對rVAR2蛋白進(jìn)行定位進一步推進，進(jìn)一步驗證了Attana得到的結(jié)果導向作用，即rVAR2蛋白與前列腺腫瘤組織切片強(qiáng)結(jié)合，而不與扁桃體組織結(jié)合示範推廣。證明Attana能準(zhǔn)確對組織切片上抗原-抗體的親和力進(jìn)行定性和定量。

 
圖5.檢測發(fā)現(xiàn)純化的胎盤樣（pl-CS）受體與rVAR2蛋白的KD值為3.6nM即將展開，具有強(qiáng)結(jié)合大幅增加，證明Attana可準(zhǔn)確檢測純化蛋白間的相互作用。

圖6.將乳腺癌細(xì)胞(SKBR3)傳承、前列腺癌細(xì)胞(LNCap)與中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）相比等特點，免疫組化和Attana的結(jié)果一致，乳腺癌細(xì)胞與前列腺癌細(xì)胞均檢測到細(xì)胞與rVAR2蛋白有著很強(qiáng)的親和力多種。

圖7.高表達(dá)AR的Lncap細(xì)胞與AR抗體有強(qiáng)的親和力將進一步，而雄激素非依賴的PC3與AR抗體的親和力相對較弱。這一結(jié)果進(jìn)一步在細(xì)胞水平上證明了Attana具有廣泛的兼容性發展成就。

圖8.采用Attana對AR抗體與FFPE組織切片的親和力檢測結(jié)果成就，與免疫組化結(jié)果一致，即免疫組化陽性的FFPE前列腺癌組織開展面對面，對AR抗體有強(qiáng)的親和力系統，免疫組化陰性的FFPE胎盤組織，對AR抗體無相互作用進一步提升。這一結(jié)果在組織切片水平上也證明了Attana能有效監(jiān)測抗體與切片的結(jié)合空間廣闊。

 

實驗操作總結(jié)：
1、組織切片如何固定在COP-1芯片上改革創新？
Attana的COP-1芯片在室溫用聚L-賴氨酸溶液包被5分鐘知識和技能。包被后，用PBST沖洗芯片新模式，并在室溫干燥2小時更加廣闊。將甲醛固定石蠟包埋（FFPE）組織樣品切成5μm厚的薄片，并貼在芯片上提高，60℃烘烤1h方便。

2、脫蠟和抗原修復(fù)
將COP-1芯片上的組織樣品浸沒在EZprep溶液中各領域，65℃水浴30min進(jìn)行脫蠟應用領域。之后PBS洗3次。再在95℃下進行培訓，用pH6.0的10mM檸檬酸鈉發展機遇、0.05％吐溫溶液浸泡30min進(jìn)行抗原修復(fù)長效機製。

技術(shù)參數(shù)： 產(chǎn)品應(yīng)用： 配置清單：